项目编号 |
实验项目名称 |
主要实验步骤 |
主要用途及说明 |
1. |
石蜡包埋 |
标本固定→取材→开机→脱水→浸蜡→包蜡块→切片→捞片→染色. |
石蜡包埋的组织块便于长期保存 |
2. |
石蜡切片 |
准备切片机→开启漂片机→装刀→取蜡块→装蜡块→切片→漂片→捞片→烤片 |
组织学常规制片技术中 为广泛应用的方法 |
3. |
细胞爬片 |
细胞准备→切片准备→消毒切片→滴片→过夜→固定→染色 |
主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等 |
4. |
HE染色 |
脱蜡→水化→自来水冲洗10min→苏木精套核5min→盐酸乙醇分化、氨水反→自来水冲洗15min→伊红染色5min→快速冲洗一次3s→梯度酒精脱水→透明、封片、镜检。 |
HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中 基本、使用 广泛的技术方法.组织学中常用的是苏木精)和伊红染色法,简称HE染色法。苏木精使细胞核和细胞质内的嗜碱性物质着蓝紫色,伊红使细胞质基质和间质内的胶原纤维等着红色。 |
5. |
病理片免疫组化 |
脱蜡、水化→PBS洗→次各5min→3% H2O2（80%甲醇）滴加在组织上，室温静置10min→PBS洗3次各5min→抗原修复(microwave for 10minutes )→PBS洗3次各5min→滴加正常山羊血清封闭液，室温30min。甩去多余液体→滴加一抗，4℃过夜或者37℃1h→4℃过夜后需在37℃复温45min→PBS洗3次各5min→滴加二抗，室温或37℃1h→PBS洗3次各5min→DAB显色5~10min，在显微镜下掌握染色程度→自来水冲洗10min→苏木精复染5min；盐酸乙醇分化→自来水冲洗15min→脱水、透明、封片、镜检。 |
是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 |
6. |
免疫荧光 |
脱蜡、水化→PBS洗3次各5min→3% H2O2（80%甲醇）滴加在组织上，室温静置10min→PBS洗3次各5min→抗原修复→PBS洗3次各5min→滴加正常山羊血清封闭液，室温30min。甩去多余液体→滴加一抗，4℃过夜或者37℃1h→4℃过夜后需在37℃复温45min→PBS洗3次各5min→再滴加荧光二抗，同上步骤，染色30min，37℃，缓冲液洗3次，每次5min，缓冲甘油封片，镜检。 |
以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术 |
7. |
采集图片 |
开机→打开软件→调整色彩对比→拍照→命名保存 |
用于采集切片和细胞的照片 |
8. |
免疫荧光图片采集 |
开机→打开软件→调整色彩对比→拍照→命名保存 |
用于采集切片和细胞的照片 |
9. |
活细胞工作站图片采集 |
开机→打开软件→调整色彩对比→拍照→命名保存 |
用于采集切片和细胞的照片,同时也可以采集细胞动态图 |
10. |
脱钙 |
配制脱钙液→3天换液一次→直至组织标本符合条件→上机 |
对于骨组织或软骨组织在做蜡块切片时需要脱钙处理 |
11. |
特殊染色 |
针对不同染色使用不同试剂→按说明书操作 |
特殊染色是病理诊断不可缺少的手段,正确应用可以验证各种微生物的存在、证明组织内的某些化学物质、发现“HE”切片上看不见的成分等,有些则起着决定性诊断的作用 |
12. |
组织标本取材 |
甲醛固定→取成0.3x2x1建方大小 |
为包蜡块做准备 |
