项目编号 |
实验项目名称 |
主要实验步骤 |
主要用途及说明 |
1 |
硫酸铵沉淀法纯化蛋白 |
①硫酸铵沉淀，弃上清，去除杂蛋白。②硫酸铵沉淀，弃上清，收集目的蛋白。 |
运用硫酸铵沉淀蛋白的特性，可对鼠、兔、羊、鸡、人等蛋白进行提取纯化，具有耗时短，损失小的特点，可制备低等纯度的蛋白。 |
2 |
辛酸硫酸铵沉淀法纯化蛋白 |
①正辛酸沉淀，弃沉淀，除去杂蛋白。②硫酸铵沉淀，弃上清，收集目的蛋白。 |
运用硫酸铵沉淀蛋白的特性，可对鼠、兔、羊、鸡、人目的蛋白进行提取纯化，具有纯度较高，损失小的特点，可制备中等纯度的蛋白。 |
3 |
亲和层析纯化蛋白 |
①用沉淀法初步提取目的蛋白。②根据不同的蛋白选择不同的亲和柱。③将蛋白与亲和柱亲和。④清洗柱上杂蛋白。⑤洗脱收集目的蛋白。 |
运用蛋白的特异亲和性来提取目的蛋白，是目前科研 常用的纯化技术，可对各种蛋白进行纯化，如血清、腹水、抗体、抗原、表达蛋白等，能制备高纯度的蛋白。 |
4 |
离子交换层析纯化蛋白 |
①用沉淀法初步提取目的蛋白。②根据不同的蛋白选择阴离子柱或阳离子柱。③将蛋白与离子柱吸附。④梯度洗脱蛋白，收集目的蛋白。 |
运用蛋白表面所带的电荷来分离蛋白，在低盐结合，高盐洗脱，是工厂企业常用的纯化技术，能制备高纯度的蛋白。 |
5 |
凝胶过滤层析纯化蛋白 |
①用沉淀法初步提取目的蛋白。②根据蛋白大小不同选择合适范围内的分子筛柱。③将蛋白上柱分离。④收集分离开的目的蛋白。 |
运用蛋白的大小特性不同对蛋白进行分离，理论上可分离所有蛋白，是层析中必不可少的纯化技术，可制备高纯度的蛋白。 |
6 |
疏水层析纯化蛋白 |
①用沉淀法初步提取目的蛋白。②将蛋白上柱结合。③梯度洗脱，收集洗脱蛋白。 |
运用蛋白的亲水和疏水性质来分离蛋白，在高盐结合，低盐洗脱，是目前比较冷门的纯化技术，可制备高纯度的蛋白。 |
7 |
蛋白除盐与换液 |
①以需要更换的缓冲液或低盐缓冲液做流动相。②将蛋白样品上柱。②监测紫外与电导，收集蛋白。 |
运用蛋白与盐分子大小不同，从而实现除去盐或替换缓冲液。 |
8 |
蛋白提取 |
①加入蛋白提取液研磨细胞或组织。②超声破碎，释放蛋白。③去除碎片，得到总蛋白。 |
将总蛋白从细胞或组织里提取出来的技术。 |
9 |
蛋白定量 |
①将标准品梯度稀释。②平行加入目的蛋白。③加入工作液后反应。④读取数值进行浓度计算。 |
运用BCA蛋白定量法对总蛋白的浓度进行测定，是全球公认的金标准之一。 |
10 |
蛋白鉴定 |
根据蛋白的不同方法和步骤也有所不同，具体技术请来电咨询。 |
运用Western、ELISA、SDS-PAGE、免疫学实验等技术对蛋白进行深度分析，因选择的技术不同，对蛋白检测也不同，适用于对蛋白的特异性与表位结构研究。 |
11 |
琼脂糖凝胶颗粒交联蛋白 |
①将活化的介质进行清洗。②将目的蛋白与介质交联。③终止并清洗。④保存 |
运用sepharose 4B和蛋白进行交联，做为用来捕获目的蛋白的介质，此法类似于亲和层析，适用于想自行纯化而没有介质的实验研究。 |
12 |
蛋白冻干 |
①将需要冻干的蛋白样品进行分装。②放入-80℃冷冻。③放入冻干机低温抽负压干燥。 |
运用冷冻干燥技术将蛋白与溶液进行分离，以便长时间保存。 |
13 |
蛋白保存 |
①将蛋白分装并冷冻干燥。②放入-80℃保存。 |
运用超低温冰箱对蛋白进行保存，因保存时间不同所产生的费用也不同。 |
14 |
高压灭菌 |
①将清洗后的瓶子或器械进行包裹，溶液需放入容器内。②134℃ 20min对需要消毒的物品进行高压蒸汽灭菌。③物品取出烘干，溶液室温放凉。④放入无菌柜保存。 |
通过高压蒸汽法消毒需要灭菌的物品，是为实验准备无菌物品的基本方法。 |
